单B细胞抗体制备

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• 单克隆抗体(mAb)是许多诊断应用和研究的重要工具。此外，单克隆抗体已成为许多疾病的理想治疗用品，在癌症、自身免疫性疾病和感染性疾病的治疗中得到了很好的应用。为了研究和治疗目的，已有许多技术用于生成单克隆抗体。单B细胞抗体制备技术是近些年新发展的一种制备单抗的技术。该方法具有速度快、通量高、以及抗体重轻链可变区天然配对的优势，是目前新型、高效的抗体发现方法之一。

  

  单B细胞抗体制备的原理是每个B细胞只含有一对功能性的重链和轻链，每个B细胞具有只产生一种特异性抗体的特性，所以可以直接从单个B细胞中扩增出抗体基因获得单抗。

• 单B细胞抗体制备流程

  

• 单B细胞分选

  根据研究应用，可以随机或抗原选择性地从外周血或淋巴组织(如骨髓、脾脏)中分离单B细胞。对于B细胞分离，目前单B细胞分选方式有流式细胞分选法、 磁珠细胞分选法、 显微操作法、 激光显微切割法以及微流控分选法。 其中流式细胞荧光分选技术 (Fluorescence activated Cell Sorting，FACS)是目前一种成熟、 有效的单细胞分选方法。

  

• 单B细胞Ig基因转录,扩增,测序

  从单个B细胞中构建互补DNA (cDNA)为同时分析表达的IgH和IgL链基因提供了一种正确的方法。通常，单B细胞cDNA合成是在用于细胞沉积和细胞裂解的设备中进行的(例如96孔板、纳米孔芯片等)，这确保了方便处理大量样品并将交叉污染的风险降至最低。全长Ig可变区基因转录物通过巢氏PCR进行扩增，其中RT-PCR产物可作为第一轮PCR的样品进行进一步反应。

  无论使用何种Ig可变区基因扩增策略，编码抗体特异性的单B细胞Ig可变区基因转录信息随后通过测序得到。然后利用各种数据库，如NCBI的IgBLAST、IMGT，可以很容易地识别和分析重排的V、D和J基因片段是否存在突变、插入和缺失。

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